按试剂类型分类
需要明确qPCR试剂的核心是DNA聚合酶和缓冲体系，根据是否包含UNG酶和dUTP，可以分为以下两类：
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含UNG/dUTP防污染体系（常规推荐）
这类试剂通过UNG酶在PCR前消化掉含有dU的扩增产物（如之前的气溶胶污染），从而有效防止产物污染导致的假阳性。绝大多数常规实验都推荐使用这类试剂。
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Thermo Fisher (赛默飞)
- 核心产品：PowerUp™ SYBR® Green Master Mix
- 特点：性能非常优秀，灵敏度和特异性都很好，配方优化，对抑制剂有较强的耐受性，适用于从cDNA到基因组DNA等多种模板，是目前市场上非常受欢迎的“万金油”型试剂。
- 适用：几乎所有常规的SYBR Green I法qPCR实验。
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Takara (宝生物)
- 核心产品：SYBR® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus)
- 特点：经典且稳定的配方，在全球范围内被广泛使用和验证，Hot Start Taq酶在低温下无活性，可以减少非特异性扩增，可靠性极高，是很多实验室的首选。
- 适用：常规SYBR Green I法qPCR，尤其适合对实验重复性和稳定性要求高的场景。
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Vazyme (南京诺唯赞)
（图片来源网络，侵删）- 核心产品：2× ChamQ SYBR qPCR Master Mix
- 特点：国产试剂的领军品牌，性价比极高，其性能经过大量实验室验证，与进口品牌相比毫不逊色，在灵敏度、特异性、稳定性方面表现优异，近年来市场份额增长迅速，是国内很多高校和科研机构的首选。
- 适用：常规SYBR Green I法qPCR，是进口试剂的完美替代品，尤其适合预算有限但追求高性能的实验室。
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Bio-Rad (伯乐)
- 核心产品：iQ™ SYBR® Green Supermix
- 特点：同样是市场上的主流产品，与Bio-Rad自己的CFX系列qPCR仪搭配使用效果更佳，其优化的缓冲体系能提供良好的扩增效率和重复性。
- 适用：常规SYBR Green I法qPCR，尤其适用于使用Bio-Rad仪器的用户。
不含UNG/dUTP的快速/高保真体系
这类试剂通常不含防污染体系,但具有更快的反应速度或更高的保真度（即更低的错配率）。
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Takara (宝生物)
- 核心产品：TB Green™ Fast qPCR Mix
- 特点：反应速度比常规Premix Ex Taq快约2倍，适合高通量筛选或对时间有要求的实验，同样具备Hot Start功能。
- 适用：需要快速完成实验的SYBR Green I法qPCR。
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Thermo Fisher (赛默飞)
（图片来源网络，侵删）- 核心产品：Platinum™ SuperFi™ DNA Polymerase
- 特点：以极高的保真度著称，其错误率是普通Taq酶的1/6，适用于需要克隆测序、突变检测等对序列准确性要求极高的实验。
- 适用：高保真qPCR实验。
按化学原理分类
qPCR试剂根据检测原理分为SYBR Green I法和探针法。
SYBR Green I 法试剂（以上介绍的均为此类）
- 原理：SYBR Green I是一种可以嵌入双链DNA的荧光染料，没有特异性，只要有PCR产物生成，荧光信号就会增强。
- 优点：
- 通用性强：一对引物即可，无需设计探针，成本低。
- 操作简单：只需设计引物，无需合成探针。
- 缺点：
- 非特异性：会结合所有dsDNA，包括引物二聚体和非特异性扩增产物，可能导致结果假阳性。
- 需要熔解曲线分析：实验后必须进行熔解曲线分析，以验证产物的特异性。
探针法试剂
探针法使用特异性寡核苷酸探针来检测目标序列,具有更高的特异性和准确性。
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TaqMan 探针法 (5' nuclease assay)
- 原理：探针两端分别标记了报告基团和淬灭基团，当探针完整时，淬灭基团抑制报告基团的荧光，PCR延伸时，Taq酶的5'→3'外切酶活性会降解探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，每一条探针只对应一个目标序列。
- 主流品牌：
- Thermo Fisher: TaqMan™ Gene Expression Master Mix 和 TaqMan™ Fast Advanced Master Mix，这是探针法的“金标准”，种类最全，应用最广泛，从基因表达到SNP检测都有成熟的试剂盒。
- Takara: Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) / Probe qPCR Kit，性能稳定，与TaqMan体系兼容，同样是市场上的重要选择。
- Vazyme: 2× ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 也支持探针法，但更主流的是其探针法专用产品，如 2× Probe qPCR Master Mix，性价比同样很高。
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其他探针技术
- Molecular Beacons (分子信标) 和 Hydrolysis Probes (水解探针)：原理类似，但探针设计不同，一些厂商也提供相应的酶和缓冲液。
主流品牌横向对比
| 品牌 | 国家/地区 | 核心SYBR Green产品 | 核心探针法产品 | 特点与优势 |
|---|---|---|---|---|
| Thermo Fisher | 美国 | PowerUp™ SYBR Green Master Mix | TaqMan™ Master Mix | 行业领导者，产品线最全，性能优异，尤其TaqMan是探针法标杆。 |
| Takara | 日本 | SYBR® Premix Ex Taq™ II | Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) | 经典可靠，全球使用广泛，稳定性好，是很多教科书和protocol的首选。 |
| Vazyme | 中国 | 2× ChamQ SYBR qPCR Master Mix | 2× Probe qPCR Master Mix | 性价比之王，性能媲美国际大牌，价格优势明显，国内市场占有率极高。 |
| Bio-Rad | 美国 | iQ™ SYBR® Green Supermix | iQ™ Probe Supermix | 仪器与试剂结合紧密，与CFX系列仪器兼容性好，是Bio-Rad用户的优选。 |
| Agilent | 美国 | Brilliant III SYBR Green QPCR Master Mix | Brilliant III QPCR Master Mix | 性能优异，尤其在某些特定应用中表现突出。 |
| Roche | 瑞士 | LightCycler® 480 SYBR Green I Master | LightCycler® 480 Probe Master | 专为LightCycler®系列实时荧光定量PCR仪优化，配套使用效果最佳。 |
如何选择合适的试剂？
选择哪个品牌和类型的试剂,主要取决于以下几个因素：
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实验目的：
- 基因表达差异分析：如果目的基因特异性好，首选SYBR Green I法，成本低且高效，如果有多重反应或需要绝对定量，或者基因序列复杂易有非特异性扩增，则选择探针法。
- SNP基因分型/甲基化检测：必须使用探针法（如TaqMan探针、ARMS-PCR等）。
- mRNA绝对定量：需要制作标准曲线，探针法（如TaqMan）的绝对定量更准确。
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预算：
- 预算充足：Thermo Fisher, Takara, Bio-Rad等国际大牌是可靠的选择。
- 追求性价比：Vazyme等国产优质品牌是极佳的选择，性能有保障，能大幅降低实验成本。
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实验室习惯与仪器：
- 如果实验室长期使用某个品牌的试剂并积累了丰富的经验,可以继续沿用，以保证实验的连续性和可重复性。
- 如果使用特定品牌的qPCR仪（如Bio-Rad CFX, Roche LightCycler），优先选择该厂商推荐的配套试剂，通常能获得最佳的仪器-试剂匹配效果。
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实验通量：
- 对于高通量筛选,可以考虑使用快速型试剂（如Takara的Fast Mix, Thermo Fisher的Fast Master Mix），可以节省大量时间。
总结建议
- 新手入门/常规实验室：推荐使用 Takara SYBR Premix Ex Taq II 或 Vazyme ChamQ SYBR Master Mix，这两者都是经过市场长期检验的可靠产品，性能稳定，价格适中。
- 追求性能与稳定：推荐 Thermo Fisher PowerUp SYBR Green Master Mix 或 Takara 的产品，它们在灵敏度和抗干扰能力上表现出色。
- 探针法实验：Thermo Fisher TaqMan 是无可争议的首选，如果预算有限，Vazyme的探针法Master Mix 是非常优秀的替代品。
- 高保真实验：选择 Thermo Fisher Platinum SuperFi DNA Polymerase。
最终的选择建议可以先小规模预实验,比较不同品牌试剂在您特定模板和引物下的表现（如扩增效率、熔解曲线、重复性等），再确定最适合您实验室的试剂。
